Northern 和 Southern Blotting，以及 Colony 和 Plaque Lifts

更新時間：2012-03-19 點擊次數：8042

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉印膜和Immobilon-NC 轉印膜

Millipore 提供了一種用于核酸應用轉印膜選擇。使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉印膜可以在 Southern blotting，Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實驗中獲得出色的結果。 Immobilon-NC 轉印膜，是主要的 Southern 和 colony/plaque 實驗方案中zui初使用的膜，也可作為一種靈敏度較低但更經濟的選擇。

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉印膜

Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉印膜，非常適合于可靠與可重現的轉移、固定、雜交及隨后的重復雜交實驗。其表面均一分布的正電荷密度確保得到zui高的靈敏度和zui低的背景信號。此膜經強化處理具有超長的耐久性，這一點對于重復雜交試驗至關重要。

可提供詳細的實驗方案，在使用 Immobilon-Ny+ 轉印膜時可用于優化轉印結果。

靈敏度zui高，而背景信號zui小
非常出色的重復雜交特性
在化學發光法和放射性檢測系統中均表現出色

性能

Southern Blotting

直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優化實驗方案下的表現：每種膜在其推薦的紫外波長照射下交聯。 Immobilon-Ny+ 轉印膜的雜交信號是其它兩種膜的 2 倍。

12 次重復雜交之后的信號強度

尼龍膜在254 nm 交聯，并進行了多次重復雜交，依次為：用 <sup>32</sup>P 標記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用<sup>32</sup>P 標記探針做第 7 次雜交，然后進行 5 次模擬雜交以及用 <sup>32</sup>P 標記探針做第 13 次雜交。在每個雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。模擬雜交與真實雜交*一樣，區別在于未加 <sup>32</sup>P 標記探針。在整個重復雜交過程中，Immobilon-Ny+ 的信號強度是競爭產品 A 和 B 的兩倍。

尼龍膜在 254 nm 交聯，并進行了多次重復雜交，依次為：用 ³²P 標記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用 ³²P 標記探針做第 7 次雜交，然后進行 5 次模擬雜交以及用 ³²P 標記探針做第 13 次雜交。在每個雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。模擬雜交與真實雜交*一樣，區別在于未加 ³²P 標記探針。在整個重復雜交過程中，Immobilon-Ny+ 的信號強度是競爭產品 A 和 B 的兩倍。

檢測靈敏度

將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane（條帶）中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對應。大約相當于 10 µg 人類基因組 DNA 中一個單拷貝基因序列。可通過對探針濃度加倍來提高靈敏度。在 0.01 ng 條帶中，與競爭產品 A 相比，Immobilon-Ny+ 轉印膜靈敏度稍高，而背景信號更低。

用化學發光檢測進行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA （1 µg）在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離，然后通過毛細作用轉印到 Immobilon-Ny+ 轉印膜和競爭產品帶正電尼龍膜 “A”。與烘焙相比，通過紫外交聯固定RNA 能增強信號。 Immobilon-Ny+ 轉印膜比競爭產品 A 表現出更高的靈敏度。

Colony Lifts

將載有 pUC19 或 pLH2（2.0 kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合細菌懸浮液置于瓊脂培養皿中，在 37°C 下培養過夜。將培養皿在 4°C 下冷卻30 分鐘，將菌落（直徑大約 1– 2 mm）轉印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上，或轉印至競爭產品帶正電的尼龍膜上。膜上的 DNA 在 254 nm， 60,000 µJoules/cm² 紫外光照射下交聯。然后用 a ³²P 標記的 DNA 探針對膜進行雜交，并使用磷屏成像系統顯色。

Immobilon-NC 轉印膜

Immobilon-NC 轉印膜是一種經濟型選擇，用于核酸和蛋白質印跡實驗方案。這種轉印膜是 Southern、colony/plaque 以及蛋白質實驗方案中zui初使用的膜。 NC HATF 所含的混合纖維素酯基質，不含在細胞生長過程中會干擾細胞壁完整性的表面活性劑。這些膜用于 colony lifts。 NC HAHY 所含的混合纖維素酯基質，所帶的表面活性劑能夠增強可濕性以及轉印過程中的處理能力。兩種膜對核酸和蛋白質都具有高吸附容量。適用于常規轉印。

訂購信息：

Immobilon-Ny+ 轉印膜 – 圓片濾膜

比較	目錄編號	濾膜直徑，mm	數量/包裝
	INYC08250	82	50
	INYC08550	85	50
	INYC13250	132	50
	INYC13750	137	50

Immobilon-NC 不含表面活性劑的轉印膜 – 圓片濾膜

比較	目錄編號	濾膜直徑，mm	數量/包裝
	HATF08250	82	50
	HATF08550	85	50
	HATF13250	132	50
	HATF13750	137	50

Immobilon-NC 轉印膜 – 圓片濾膜

目錄編號	濾膜直徑，mm	數量/包裝
HAHY08250	82	50
HAHY08550	85	50
HAHY13750	137	50

Immobilon-Ny+ 轉印膜 – 片和卷

比較	目錄編號	濾膜尺寸，cm x cm	數量/包裝
	INYC61150	6 x 11	50
	INYC09120	9 x 12	10
	INYC10100	10 x 10	10
	INYC15150	15 x 15	10
	INYC20200	20 x 20	10
	INYC22220	22.2 x 22.2	10
	INYC2222C	22.2 x 22.2	100
	INYC26260	26 x 26	10
	INYC00010	30 x 330	1

Immobilon-NC 轉印膜 – 片和卷

比較	目錄編號	濾膜尺寸，cm x cm	數量/包裝
	HAHY304F0	30 x 30	10
	HATF00010	33 x 300	1

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